第二章 蘋(píng)果苗木貯藏生理特性的研究

2.1 材料與方法

2.1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

本試驗(yàn)在陜西省寶雞市海升農(nóng)業(yè)有限公司冷庫(kù)進(jìn)行。寶雞市干陽(yáng)縣南寨鎮(zhèn)位于陜 西省關(guān)中地帶，屬于暖溫帶半大陸性氣候，當(dāng)?shù)貧夂驐l件適合蘋(píng)果自根砧大苗和蘋(píng)果 砧木繁育。海升公司冷庫(kù)面積寬闊，每年有一百萬(wàn)株蘋(píng)果苗木貯藏其中，擁有先進(jìn)的 溫度制冷和加濕技術(shù)，環(huán)境濕度可以控制到99.9%，為試驗(yàn)的進(jìn)行提供了可靠地環(huán)境條件。

2.1.2 試驗(yàn)材料與處理

試驗(yàn)所用材料取自海升公司繁育的一年生蘋(píng)果矮化自根砧嫁接苗和砧木，蘋(píng)果矮 化自根砧嫁接苗是2018年春季嫁接，所用砧木是M9-T337，于2017年春季定植，嫁接的品種是嘎啦，蘋(píng)果砧木的繁育方式是采用壓條繁殖，品種是M9-T337，一年生砧木。試驗(yàn)材料要求大小和規(guī)格一致，根系較密，且表面無(wú)損傷的裸根蘋(píng)果苗木，每組處理60 株苗木，設(shè)置三個(gè)重復(fù)，每次選取三棵苗木取樣。試驗(yàn)要求溫度為1℃，相對(duì)濕度 90%。鋸末來(lái)自海升公司，新高脂膜生產(chǎn)自陜西渭南促花王科技有限公司，抗蒸騰劑生產(chǎn)于四川國(guó)光農(nóng)化股份有限公司，試驗(yàn)藥品均安廠家指定要求使用。

2.1.2.1 高脂膜和抗蒸騰劑使用方法

濕鋸末處理組苗木須每隔三天對(duì)苗木表面噴灑一定的水分。

新高脂膜（主要成分：高級(jí)脂肪酸乳化液=70%）是一種植物表面保護(hù)劑，是以高級(jí)脂肪酸與多種化合物科學(xué)復(fù)配，化學(xué)性質(zhì)為PH值中性，可保溫、保濕、防病驅(qū)蟲(chóng)。母 液稀釋稀釋800倍，使用噴霧器每隔20d 對(duì)苗木噴施1次，連續(xù)噴3次。

抗蒸騰劑（主要成分：N+P₂0₅+K₂O>=200g/l，腐殖酸=40g/l），由環(huán)保型生態(tài)材料 -高分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)材料合成，能夠封閉植物表面氣孔，延緩代謝，使用時(shí)稀釋800倍噴 施苗木，使用噴霧器每隔3天噴一次，連噴3次。

2.2 試驗(yàn)測(cè)定項(xiàng)目及方法

2.2.1 苗木相對(duì)含水量的測(cè)定

將新采的植物枝條迅速剪成小塊，每處理分成兩份，每份三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)稱(chēng) 取1g(Wf)，一份于150℃烘箱中烘烤1h，然后稱(chēng)此時(shí)的重量(Wd)，另一份放入蒸餾水中浸泡70min，當(dāng)達(dá)到恒重時(shí)稱(chēng)取此時(shí)重量(Wt)。

相對(duì)含水量=(Wf-Wd)/(Wt-Wd)*100%     (2-1) 

2.2.2 苗木可溶性糖的測(cè)定

蒽酮比色法，稱(chēng)取根樣品0.5g，放入小培養(yǎng)皿(空白試驗(yàn)先加硫酸再加入根樣品， 其他操作相同)，加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把根充分浸沒(méi)在溶液內(nèi)，在37℃下暗處保溫1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反應(yīng)。

把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把紅色提出液移入試管，用少量乙酸乙酯把殘?jiān)�洗滌二至三次，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量�?0ml，用分光光度計(jì)在485nm下比色，以空白作參比讀出光密度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，求出四氮唑還原量。

計(jì)算將所得數(shù)據(jù)帶入下式，求出四氮唑還強(qiáng)度。

可溶性糖含量=(C*V1*D/W*V2*106)*100     (2-2)

式中：

C-標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出的糖含量(µg)；

V1-提取總體積(ml)；

V2-測(cè)定總體積(ml)；

D-稀釋倍；

2.2.3 苗木根系活力的測(cè)定

原理及測(cè)定方法：2，3，5-三苯基氧化四氮唑簡(jiǎn)稱(chēng)四唑或TTC。因脫氫酶活性與細(xì) 胞呼吸有關(guān)，四氮唑的還原數(shù)量也就與根系活力強(qiáng)弱呈正相關(guān)。因此，可根據(jù)紅色深 淺所反映的脫氫酶活性作為根系活力指標(biāo)。

2.2.4 苗木根系相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定

取生長(zhǎng)一致的植物根系的根尖部位，用濾紙吸干表面水分，剪成1cm小段放入燒 杯中，杯中加入50ml蒸餾水，放入真空干燥器中，用抽氣泵抽氣8min抽出細(xì)胞間空氣，立刻排盡真空罩的氣體，玻璃棒攪拌，靜置20min，用DDS-307A測(cè)量各樣品電導(dǎo)率R1，再煮沸20min，殺死植物組織細(xì)胞，冷卻至室溫，測(cè)電導(dǎo)率R2。

相對(duì)電導(dǎo)率=R1/R2*100%     (2-3)

2.2.5 苗木芽休眠狀態(tài)的測(cè)定

有絲分裂指數(shù)法。

2.2.6 苗木病菌感染狀況的調(diào)查

選取在低溫高濕庫(kù)貯藏的1000株砧木和嘎啦苗木，每15d 統(tǒng)計(jì)苗木真菌微生物感染率。

苗木根系真菌微生物感染率=被感染苗木數(shù)量/調(diào)查苗木總數(shù)量

2.2.7 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)采用Excel軟件統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)；采用23.0 SPSS進(jìn)行相關(guān)性分析，origin進(jìn)行圖表繪制。

第三章 結(jié)果與分析

3.1 不同貯藏方式對(duì)苗木含水量的影響

圖3-1(a)表明在不同貯藏方式下嘎啦苗木相對(duì)含水量貯藏增加相對(duì)含水量呈現(xiàn)先 升高后降低的趨勢(shì)，不同貯藏方式下苗木相對(duì)含水量無(wú)顯著差異，貯藏90d各處理相對(duì)含水量均開(kāi)始降低，貯藏105d新高脂膜處理苗木相對(duì)含水量高于其他三組，圖3-1(b) 貯藏期間砧木相對(duì)含水量也呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，貯藏期間新高脂膜和抗蒸騰劑處 理苗木相對(duì)含水量略高于其他兩個(gè)處理。

3.2 不同貯藏方式對(duì)苗木可溶性糖含量的影響

從圖3-2(a)可以看出嘎啦苗木可溶性固形物含量在貯藏期間呈現(xiàn)先增加后減少的 趨勢(shì)。貯藏60d，苗木可溶性糖含量達(dá)到最高，G4組苗木可溶性固性為129.36mg/g，早貯藏60d后四組苗木可溶性固形物含量開(kāi)始降低。在貯藏105d后四組處理苗木可溶性固形物含量低于貯藏前苗木可溶性固形物含量。貯藏期間各處理之間無(wú)顯著性差異。與圖 3-2(a)相似，圖3-2(b)貯藏期間砧木可溶性固形物含量呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，但砧木四組處理可溶性糖含量最高值出現(xiàn)在貯藏45d，可溶性固形物最高組G3含量為133.71 mg/g，在貯藏105d時(shí)，G1､G2､G3和G4組砧木可溶性固形物含量分別為121.54mg/g､120.44mg/g､119.13mg/g和119.77mg/g，低于貯藏前砧木可溶性固形物含量。貯藏期間各處理之間無(wú)顯著性差異。

3.3 不同貯藏方式對(duì)苗木根系電導(dǎo)率的影響

由圖3-3(a)可知貯藏期間四組處理嘎啦苗木根系相對(duì)電導(dǎo)率逐漸升高，不同貯藏 時(shí)期四組處理嘎啦苗木相對(duì)電導(dǎo)率呈現(xiàn)顯著性差異。其中貯藏45d和60d時(shí)，G2處理嘎啦苗木根系相對(duì)電導(dǎo)率顯著高于G1組處理(p<0.05)，貯藏75d后，G2處理苗木根系相對(duì)電導(dǎo)率顯著高于G1和G3處理(p<0.05)，到貯藏105d，四組處理苗木相對(duì)電導(dǎo)率率達(dá)到最高分別為58.24%、61.28%、56.35%和60.57%。與圖3-3(a)相同，圖 3-3(b)砧木根系電導(dǎo)率貯藏期間也逐漸升高，不同處理之間存在差異性，其中貯藏75d，G2和G4組處理砧木根系相對(duì)電導(dǎo)率顯著高于其他兩個(gè)相對(duì)電導(dǎo)率(p<0.05)，從貯藏90d起，處理G1砧木相對(duì)電導(dǎo)率開(kāi)始高于其他三組。

3.4 不同貯藏方式對(duì)苗木根系活力的影響

由圖3-4(a)可知，貯藏期間不同處理嘎啦苗木根系活力具有顯著性差異，貯藏60d，新高脂膜和濕鋸末處理組根系活力顯著高于其他兩個(gè)(p<0.05)，貯藏105d，新高脂膜處理根系活力顯著高于抗蒸騰劑和高濕冷藏處理苗木，且四組處理根系活力高于貯藏前的苗木根系活力。圖3-4(b)貯藏 60d和105d，新高脂膜和濕鋸末處理組根系活力顯著高于其他兩個(gè)(p<0.05)。

3.5 貯藏方式對(duì)苗木芽休眠狀態(tài)的影響

圖3-5(a)表明苗木在冷藏期間，兩種苗木的有絲分裂指數(shù)呈現(xiàn)先降低后逐漸升高的趨勢(shì)，且貯藏前和貯藏期間砧木的芽有絲分裂指數(shù)高于嘎啦苗木，砧木芽有絲分裂指數(shù)在貯藏45d和60d內(nèi)的半個(gè)月時(shí)間里接近零或等于零，隨后緩慢升高，在貯藏105d達(dá)到0.32接近貯藏前有絲分裂指數(shù)。嘎啦苗木在貯藏前一個(gè)月有絲分裂指數(shù)快速下降到原來(lái)的0.17%，到貯藏60d有絲分裂指數(shù)為0，隨后同樣開(kāi)始緩慢升高，到105d達(dá)到0.57。

圖3-5（b）表明貯藏15d，冷藏高濕的嘎啦苗木有絲分裂指數(shù)快速下降到0.16，并與貯藏30d到75d苗木有絲分裂指數(shù)達(dá)到或接近0，隨后開(kāi)始緩慢升高到貯藏105d的0.31，砧木有絲分裂指變化規(guī)律同嘎啦苗木相似，在貯藏30d到75d有絲分裂指數(shù)為0，隨后緩慢升高。同圖3-5(a)不同，圖3-5（b）苗木芽有絲分裂指數(shù)為零或接近零的持續(xù)時(shí)間為兩個(gè)月，且貯藏105d指數(shù)雖升高但較小。

3.6 低溫高濕貯藏期間苗木生理變化

圖3-6（a）顯示低溫高濕期間，苗木根系TTC含量呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，在貯藏45d苗木活力達(dá)到最高值后逐漸下降，砧木苗木相對(duì)含水量在貯藏期間也呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，由于貯藏環(huán)境濕度較大，到貯藏105d 苗木相對(duì)含水量整體沒(méi)有減少。苗木可溶性固形物貯藏期間逐漸降低，到貯藏105d苗木可溶性糖含量甚至低于貯藏前苗木可溶性糖含量。值得注意的是貯藏期間苗木根系相對(duì)電導(dǎo)率和病菌感染率持續(xù)增加，兩者之間相關(guān)性達(dá)到0.967，這可能是導(dǎo)致苗木后期根系TTC下降的原因。

圖3-6(b)顯示嘎啦苗木生理指標(biāo)變化復(fù)雜，苗木可溶性固形物在貯藏75d后開(kāi)始升高，苗木根系TTC到貯藏后期開(kāi)始降低，苗木相對(duì)含水量與砧木相似貯藏期間整體變化較小，與圖3-6（a）相同貯藏期間嘎啦苗木根系電導(dǎo)率和病菌感染率逐漸升高，表現(xiàn)出較高的相關(guān)性。